合成时间根据多肽序列长度和难易程度有所不同。常规多肽合成时间大约为2周,同时,金斯瑞提供快速多肽合成服务,快至3天交付。
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合成时间根据多肽序列长度和难易程度有所不同。常规多肽合成时间大约为2周,同时,金斯瑞提供快速多肽合成服务,快至3天交付。
金斯瑞多肽以冻干粉的形式发货,储存在2ml离心管内,同时可按客户需求进行分装。每条多肽均提供MS和HPLC报告,除此之外,如果订购了额外的QC,金斯瑞也提供对应的检测报告。
金斯瑞提供纯度区间为粗品,>70%到>98%的多肽。举例来说,纯度为>95%,表示冻干粉中多肽净含量(不是总重)的95%是您的目标多肽,另外5%是非目标多肽,纯化过程中被一起带入到了产品中。多肽合成的过程中,因为某些氨基酸位点缩合效率略低,导致缩合不完全,所以就产生了非目标多肽。一般情况下我们用反相高效液相色谱(RP-HPLC)来检测多肽纯度。
不同的实验需要特定的多肽纯度,下表是几种多肽应用领域中的纯度建议。
最低纯度 | 应用领域 | |
---|---|---|
粗品 | 突变筛选 | 蛋白质组学 |
序列优化 | 受体-配体相互作用 | |
>75% | ELISA 检测 | 多抗抗原设计 |
多肽阵列 | 抗原亲和性分析 | |
>85% | 体外生物分析 | Western blot |
表位筛选 | 半定量酶机制研究 | |
多抗开发 | 细胞粘附性研究 | |
>95% | 体外分析 | 定量磷酸化研究 |
NMR 研究 | 定量蛋白酶解研究 | |
定量配体-受体互作研究 | ||
>98% | 晶体学研究 | 临床研究 |
GMP级多肽药物研究 | SAR研究 | |
化妆品肽研究 |
金斯瑞是通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定目标肽中肽键在特定吸收波长下的紫外吸收值计算得到多肽纯度的,用水和乙腈梯度洗脱的方式来分离提纯得到。其中,水分和残留的盐分并不能通过UV检测器进行测定,检测结果还存在其他一些杂质,包括残缺序列肽(比目标肽少一个或更多氨基酸残基的短肽)、截序列(因防止残缺序列肽的产生封端产生的多肽)、脱保护不完全的肽(合成或者最终切割过程中产生的多肽)。
理解多肽净含量和多肽总重(毛重)的区别是非常重要的。一般情况下,多肽冻干粉样品不仅仅包含多肽,同时包含一些其它物质,例如水,被多肽吸收的溶剂,反离子和盐。
多肽总重(毛重)是指所有这些混合物的重量。
净肽含量是相对于非肽类物质、平衡离子以及水分而言的,除去这些,剩余的即为净肽含量。净肽含量可通过氮元素分析或者氨基酸组分分析进行测定,通常占总肽总重的50-80%。
净肽含量不同于多肽纯度,多肽纯度是指目标多肽占样品中多肽的百分比。
多肽样品中杂质大部分是反离子,小部分包含水、被多肽吸收的溶剂和一些其他物质等。 假设交付到您手中的多肽产品中反离子三氟醋酸盐(TFA)是唯一的非多肽杂质,理论多肽净含量可以通过以下方式估算:
首先,我们将多肽的分子量分为两部分,一部分是多肽,一部分是中和多肽的TFA反离子,TFA的分子量可以通过离子数量乘以TFA反离子分子量(MW=114)计算得到。 假如合成多肽的分子量是1000,这条多肽有一个游离N端和一个Arg残基,那么理论多肽净含量计算为1000/(1000 + 2 x 114 ) = 1000/1228 = 0.81或81%。因此,我们实际的多肽净含量通常可以通过定量氨基酸分析获得的。
金斯瑞独特的PepPower™合成平台结合了固相合成技术,液相合成技术,微波合成技术和重组延伸技术。基于PepPower™平台,金斯瑞可根据客户的多肽序列特性,灵活选择合适的合成技术或组合。
每条多肽具有特殊的性质,在合成过程中有时不能达到预期的结果。如果由于一些特殊的原因,金斯瑞不能成功交付多肽样品,金斯瑞技术支持人员会及时与您沟通联系。
一般情况下,通过直接的化学合成方式可以获得长度2-70AA的多肽。但是金斯瑞拥有重组延伸技术,可以合成长达200个氨基酸序列的长肽。
金斯瑞为每条多肽提供MS,HPLC报告及COA文件,其中质量控制数据包括纯度、合成量、多肽分子质量及外观等。针对特定选择的QC检测服务,金斯瑞也会提供相应的检测报告。
多肽合成是从多肽的C端向N端开始合成。
多肽文库是很多研究的高效工具,这些研究包括GPCR配体筛选,蛋白质相互作用研究,功能蛋白质组学,核苷酸结合,酶作用底物和抑制剂的筛选,抗原和表位筛选,信号分子寻找,以及其他药物筛选的重要过程。
金斯瑞提供GMP多肽合成服务,符合FDA规范,订单需求可发送邮件至peptide@genscript.com.cn,金斯瑞技术支持人员会与您联系。
目前金斯瑞可以提供二分支,四分支和八分支肽。
通常您收到的多肽产品是冻干粉末包装,收到样品后请立即将多肽保存到干燥、避光的-20℃冷冻室,尽可能地保持多肽稳定性。
使用前,请先将装有多肽的包装管从冷冻室放置到室温干燥条件下,待其温度自然升温到室温后,再打开瓶盖。否则,开盖时空气中水汽会进入样品管,降低多肽稳定性。
一旦打开,应迅速称量完毕,并立即密闭以免潮解,亲水性多肽更应注意避免反复冻融。短期的运输中外界温度不会影响多肽的有效期和质量。
在化学术语中,反离子是溶液或电化学系统中与另一个离子具有相反电荷的离子。在多肽合成中,反离子如TFA被用于将多肽与树脂分离过程以及高效液相色谱分离。具体来说,当序列中含有碱性氨基酸,如Arg、His和Lys或含有N端游离氨基时,需要TFA进行质子化,从而得到TFA盐。
但是在细胞方面的实验中,高浓度TFA可能会有一定的影响(可见造成多肽分析实验失败的五大原因)。金斯瑞提供了两种优质TFA去除服务:保证型TFA转盐(保证TFA含量<1%)和标准型TFA转盐(TFA<10%)。
常用的载体蛋白有血蓝蛋白(KLH)、牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)三种,由于载体蛋白的分子较大,结构较复杂,其水溶性有限,导致少部分多肽偶联完载体蛋白后,溶液中会出现絮状的悬浊液,不是完全澄清透明的。一般情况下,这并不影响其免疫原性,浑浊液可以用于免疫反应。
金斯瑞建议在设计磷酸化修饰时,磷酸化修饰距离N 末端不超过10个氨基酸,以避免耦合效率下降。点击查看金斯瑞多种磷酸化修饰。
一般最多做三个,还需要根据具体序列分析。
金斯瑞建议在多肽分子和荧光修饰之间添加linker,可以减少荧光修饰对多肽折叠以及与受体结合的影响。但是,如果荧光修饰的目的是为了定量不同结构间的荧光迁移,则不建议引入linker。
这类修饰可以赋予多肽序列天然蛋白质的特性。
聚乙二醇修饰是通过共价键结合的方式向目标分子添加高分子聚合物(乙二醇)。聚乙二醇修饰通过伪装多肽,骗过宿主细胞的免疫系统,增强多肽的治疗效果,并增加疏水药物的溶解度和生物利用率。它也可以通过降低肾脏清除率来延长多肽的循环时间。
可以。D型天然氨基酸一共19种。天然氨基酸中Gly 没有手性结构,其他天然氨基酸的D型结构在金斯瑞都可以选择。可查看金斯瑞特殊氨基酸列表。
金斯瑞提供5-FAM、FITC、TMR、pNA、AMC、AFC、Dansyl和MCA。详情请看金斯瑞荧光修饰列表。
常用作linker 的氨基酸包括Ahx, Beta-Ala, Gly, GABA, Ava